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Expression und Reinigung rekombinanter Proteine

Eine Reihe biophysikalischer Methoden erfordern große Mengen an rekombinant exprimiertem und gereinigtem Protein.

Hinzu kommt, dass zur Lösung der dreidimensionalen Struktur von Proteinen mittels NMR die Herstellung isotopenmarkierter Proteine nötig ist. Aufgrund dessen werden von uns effiziente rekombinante Expressionssysteme verwendet, die Zielprotein-abhängig optimiert werden. Zu den Expressionssystemen gehören neben E.coli auch Hefen, humane bzw. tierische Zellinien und Insektenzellen. Die so exprimierten Proteine werden anschließend mit Hilfe biochemischer Methoden wie Affinitäts-, Ionenaustausch-, Größenausschluss- oder Hydrophobe Interaktionschromatographie gereinigt bzw. tag-basiereten Reinigungsverfahren unterzogen.

Proteinexpression

  • Hänel K, Möckel L, Brummel M, Peiris K, Hartmann R, Dingley AJ, Willbold D, Loidl-Stahlhofen A
    Expression and purification of soluble HIV-2 viral protein R (Vpr) using a sandwich-fusion protein strategy
    Prot. Expr. Purific. 95, 156-161 (2014)
  • Mirecka EA, Gremer L, Schiefer S, Oesterhelt F, Stoldt M, Willbold D, Hoyer W
    Engineered aggregation inhibitor fusion for production of highly amyloidogenic human islet amyloid polypeptide
    J. Biotechnol. , (2014)
    http://dx.doi.org/10.1016/j.jbiotec.2014.06.006
    http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168165614002879
  • Marbach, J; Zentis, P; Ellinger, P; Müller, H; Birkmann, E
    Expression and characterization of fully posttranslational modified cellular prion protein in Pichia pastoris
    Biol. Chem. 394, 1475-1483 (2013)
  • Glück JM
    Ligand interaction analysis of membrane-anchored proteins.
    Schriften des Forschungszentrums Jülich Reihe Gesundheit, Band 31, (2011)
    http://wwwzb1.fz-juelich.de/contentenrichment/inhaltsverzeichnisse/2010/verlag/gesund31_i.pdf
  • Glück JM, Hoffmann S, Koenig BW, Willbold D
    Single Vector System for Efficient N-myristoylation of Recombinant Proteins in E. coli
    PLoS ONE 5, e10081 (2010)
    full text open access
  • Wiesehan K, Funke SA, Fries M, Willbold D
    Purification of recombinantly expressed and cytotoxic human amyloid-beta peptide.
    J. Chrom. B 856, 229-233 (2007)
  • Wittlich M, Wiesehan K, Koenig BW, Willbold D
    Expression, purification, and membrane reconstitution of a CD4 fragment comprising the transmembrane and cytoplasmic domains of the receptor.
    Protein Expr. Purif. 55, 198-207 (2007)
  • Koenig BW, Rogowski M, Louis JM
    A rapid method to attain isotope labeled small soluble peptides for NMR studies.
    J. Biomol. NMR 26, 193-202 (2003)
  • Preusser A, Jonas G and Willbold D
    Purification of recombinantly expressed human cluster determinant 4 cytoplasmatic domain.
    J. Chromatogr. B 786, 39-44 (2003)

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